华体会- 华体会体育官网- 体育APP下载瑞孚迪AlphaPlex双因子检测：高效、灵敏的细胞因子分析平台

2026-06-23 14:29:34

　　华体会,华体会体育官网,华体会体育,华体会体育APP下载在生命科学研究和药物开发中，细胞因子参与了许多病理过程，是免疫学、炎症研究、肿瘤微环境分析等领域的重要检测指标。然而，传统的免疫测定方法虽然经典，但往往面临耗时、样本需求量大、检测范围窄、单因子检测等挑战。瑞孚迪（Revvity）推出的AlphaPlex技术能够在同一样本中对两种不同的细胞因子进行分析，是一种高效、灵敏、均相的免疫检测平台。

　　以IL-6和IL-8的检测为例 (图1)：生物素化的抗分析物抗体与涂有链霉亲和素的Alpha供体磁珠 (Donor beads) 结合；而其他抗分析物抗体则分别与AlphaLISA（IL-8）或AlphaPlex 545 (IL-6) 受体磁珠 (Acceptor beads) 结合。在分析物存在的情况下，这些磁珠会相互靠近。这种接近会引发一系列反应：供体磁珠在680 nm激光激发下，将周围的氧气转化为单线态氧分子；随后，单线态氧分子触发受体磁珠中的能量传递级联反应，在AlphaLISA磁珠上产生615 nm的发射光，在AlphaPlex 545磁珠上产生545 nm的发射光，信号与待检物成正比。

　　我们研究了HT-29和HeLa细胞中IL-6和IL-8的差异调节作用。针对HT-29（图2左）和HeLa（图2右）细胞系，分别绘制了两种细胞因子的独立标准曲线，以确保基质的均匀性。对这两种细胞系进行饥饿处理后，用5 ng/mL的IL-1β刺激24小时。

　　数据表明，HT-29细胞即使数量很少也能产生大量的IL-8，但未检测到IL-6的含量 (表1)。HeLa细胞能够高水平产生这两种细胞因子，即使在每孔625个细胞的情况下，也能检测到其含量 (表2)。IL-6/IL-8双因子检测法识别了两种不同细胞系产生的特定细胞因子，显示出IL-6在HT-29 (无法测出) 和HeLa (纳摩尔级) 之间分泌模式的显著差异。

　　本文展示了利用AlphaLISA和AlphaPlex 545磁珠构建的双因子免疫检测方法在不同细胞系中的验证数据。该方法使实验更具效率：每孔可同时检测两组分析物，在实现定量分析的同时显著节省时间和成本。通过这一检测方法，我们能够在单个孔中为两种目标细胞因子建立高灵敏度、宽动态范围和高特异性的标准曲线，同时保留了Alpha技术在复杂基质中的抗干扰能力，使其可应用于细胞上清、血清血浆等动物样本 (参考推文)。 这些特性使AlphaPlex技术成为一种适用于测量复杂生物体系中双因子的有效检测手段。

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